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NEWS INFORMATION蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)過程可能遇到的常見問題有哪些呢?我們應(yīng)該怎么處理呢?一、蛋白不表達(dá)或表達(dá)量很低?1.選擇正確的表達(dá)載體和表達(dá)菌株T7啟動(dòng)子的載體應(yīng)選用BL21(DE3),BL21(DE3)pLysS,Transetta(DE3)等菌株。非T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體應(yīng)選用BL21表達(dá)菌株。2.嘗試不同的表達(dá)載體與菌株不同的蛋白,對(duì)不同載體與菌株的偏好不同,如果某一表達(dá)蛋白無法通過優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件得到明顯改善,可以更換其他菌株或表達(dá)載體。3.表達(dá)條件的優(yōu)化選擇不同的培養(yǎng)基。對(duì)于某些蛋白,在...
展示在噬菌體表面的隨機(jī)肽庫可應(yīng)用于許多方面,包括繪制抗原表位圖譜、研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和鑒定非肽配體的肽模擬型。生物活性肽分子的鑒定可以通過對(duì)固定在平板上的純化受體進(jìn)行淘選,也可以在完整細(xì)胞上進(jìn)行淘選。蛋白酶底物的鑒定可通過在隨機(jī)肽區(qū)域的上游加一段親和tag,然后選用特異性的介質(zhì)來區(qū)分切割和未切割的噬菌體。另外大的蛋白質(zhì)分子如:抗體、激素、蛋白酶抑制劑、酶和結(jié)合蛋白也可展示在噬菌體上,通過對(duì)隨機(jī)突變文庫的噬菌體篩選,分離出各種具有親和力或特異性改變的變異株。只有當(dāng)噬菌體...
對(duì)重組蛋白表達(dá)的常見問題是真核蛋白在細(xì)菌中表達(dá)時(shí)傾向于不溶。變性、聚集和/或截短形式的蛋白形成不可溶的包涵體,需要進(jìn)一步純化和重折疊,這可能是低效的和不*的。與天然蛋白質(zhì)表達(dá)的三個(gè)關(guān)鍵參數(shù):1.IPTG濃度有可能宿主中的蛋白表達(dá)將通過lac操縱子系統(tǒng)操作。這個(gè)系統(tǒng)的詳細(xì)解釋可以在別處找到,加入異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一種乳糖類似物,控制蛋白的表達(dá)。蛋白的表達(dá)應(yīng)處于生長的對(duì)數(shù)期,即當(dāng)溶液的波長600(OD600)處的光密度達(dá)到0.4-0.6。如果目標(biāo)是可...
原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)既是常用的表達(dá)系統(tǒng),也是經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為代表,具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡單等優(yōu)點(diǎn),缺點(diǎn)主要是蛋白質(zhì)翻譯后缺乏加工機(jī)制,如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊,得到具有生物活性的蛋白的幾率較小。酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)以甲醇畢赤酵母為代表,具有表達(dá)量高,可誘導(dǎo),糖基化機(jī)制接近高等真核生物,分泌蛋白易純化,易實(shí)現(xiàn)高密發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)為部分蛋白產(chǎn)物易降解,表達(dá)量不可控。酵母蛋白表達(dá)的幾大關(guān)鍵因素:1....
噬菌體篩選的噬菌體(bacteriophage)是一類以細(xì)菌為寄主的病毒,故也稱為細(xì)菌病毒,分為溫和性與烈性噬菌體兩大類。在大多數(shù)的原核生物中都可以發(fā)現(xiàn)噬菌體的存在,目前已有近2900種(株)噬菌體可通過電鏡觀察到,其中大腸桿菌是深入研究的一種寄主。噬菌體與傳統(tǒng)的抗生素治療方案相比,在臨床治療上具有更多潛在的優(yōu)勢與價(jià)值,包括噬菌體具有高度的寄主特異性、復(fù)制能力、副作用極小和無殘留等特點(diǎn)。噬菌體篩選在基因編輯上的應(yīng)用:近年來,隨著基因編輯,測序,分子生物學(xué)等技術(shù)的飛速發(fā)展,人們...
抗原對(duì)于抗體制備至關(guān)重要,好的抗原是制備優(yōu)質(zhì)抗體的前提,不同用途需求的抗體需要不同類型的抗原,所以抗原設(shè)計(jì)或者是制備不當(dāng)是不可能得到好的抗體,更別說是適合于特殊需求的抗體了??贵w制備時(shí)要求抗原的通用特性如下:1.分子量大大分子物質(zhì)能長時(shí)間留在機(jī)體內(nèi),有更多機(jī)會(huì)和免疫細(xì)胞接觸,引起免疫細(xì)胞作出免疫反應(yīng);而對(duì)于小分子物質(zhì),體內(nèi)代謝很快將其排出體外,沒有機(jī)會(huì)與免疫細(xì)胞接觸;同理,即使大分子蛋白太容易降解的也不適合做抗原。小于4kD的蛋白很難激發(fā)抗體的原因,一反面是因?yàn)槠淙菀妆慌懦鰴C(jī)...
7月27日,“隆瑪科技杯”第七屆無錫青年創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽·商工類分站賽在惠山經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)成功舉行。大賽根據(jù)團(tuán)中央“創(chuàng)青春?中國青年創(chuàng)業(yè)行動(dòng)”、團(tuán)省委“蘇青合伙人”計(jì)劃統(tǒng)一部署,以青春挑戰(zhàn)無極限、創(chuàng)業(yè)領(lǐng)導(dǎo)機(jī)構(gòu)新征程為主旨,凝聚我市廣大青年投身“大眾創(chuàng)業(yè)、萬眾創(chuàng)新”新熱潮,并助力無錫疫情防控和經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展“雙勝利”。參加本次商工類分站賽的33個(gè)項(xiàng)目聚焦節(jié)能環(huán)保、信息科技、*制造、生物醫(yī)藥、新能源、新材料六大領(lǐng)域,分成創(chuàng)新組、初創(chuàng)組、成長組三個(gè)組別進(jìn)行選拔。創(chuàng)新組針對(duì)未進(jìn)行企業(yè)注冊(cè)登記、...
實(shí)驗(yàn)外包是通過測定樣品中的RNA以檢測基因表達(dá)的分子生物學(xué)操作。通過檢測細(xì)胞分化過程中或細(xì)胞在不同環(huán)境條件下特定基因的表達(dá)情況可觀察到細(xì)胞調(diào)控或了解細(xì)胞功能等。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)外包包括瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩種,轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展和進(jìn)步起到了非常大的作用,下面我們就來了解一下這個(gè)服務(wù)項(xiàng)目:細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)外包就是把核酸導(dǎo)入細(xì)胞,已經(jīng)成為當(dāng)前生命科學(xué)研究中基本操作之一,轉(zhuǎn)染方法有多種,包括介質(zhì)介導(dǎo)和電穿孔,其中介質(zhì)又有早期的磷酸鈣法,脂質(zhì)體法和病毒介導(dǎo)。目前使用廣泛的是脂質(zhì)體介導(dǎo)法...
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