對
重組蛋白表達的常見問題是真核蛋白在細菌中表達時傾向于不溶。變性、聚集和/或截短形式的蛋白形成不可溶的包涵體，需要進一步純化和重折疊，這可能是低效的和不*的。
與天然蛋白質表達的三個關鍵參數：
1.IPTG濃度
有可能宿主中的蛋白表達將通過lac操縱子系統操作。這個系統的詳細解釋可以在別處找到，加入異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG），一種乳糖類似物，控制蛋白的表達。蛋白的表達應處于生長的對數期，即當溶液的波長600（OD 600）處的光密度達到0.4-0.6。如果目標是可溶性蛋白質，不要改變細胞中蛋白的折疊功能。已經假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侶的存在。因此，使用高濃度的IPTG（＞1mM）可能不總是產生好的結果。嘗試幾個不同的濃度，看看哪一個給高的可溶性蛋白的產量。
2.溫度
偶爾可以在37℃的典型溫度下，通過生長和誘導分離可溶性形式的蛋白質，但通常情況下，溶解度在較低溫度下增強?？蓢L試在30℃，25℃和18℃下進行誘導。
注意：如果首先在37℃生長，先讓培養物冷卻到誘導溫度，再加入IPTG。
3.誘導時間
更長并不總是更好。對于對宿主有毒的蛋白尤其如此。在誘導期間，每隔幾個小時取樣，并檢查目的蛋白的表達。典型的誘導時間根據溫度而變化，對于37℃，嘗試4小時;對于30℃，進行5-6小時，并且任何低于25℃的溫度應該允許生長過夜。
在線客服
電話咨詢
