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蛋白質印跡法(Western Blot)通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的分子生物學技術。
更新時間:2020-05-14
蛋白質印跡法(Western Blot)通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的分子生物學技術。
采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行蛋白質樣品的分離,隨后將蛋白轉移到硝酸纖維素薄膜上進行固定。固定的目的蛋白即為抗原,因此加入適量的對應抗體進行免疫反應,能與抗體緊密結合的抗原及為目的蛋白。而后加入有標記的二抗或酶,因此結合的抗原-抗體可被檢測到。
大致流程如下:
1. 蛋白質的樣品制備
2. 蛋白質定量
3. 蛋白質樣品SDS-PAGE電泳
4. 轉PVDF膜或硝化纖維膜
5. 免疫雜交反應
6. 化學發光(ECL),顯影,定影
7. 凝膠圖象分析