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慢病毒構建并包裝后,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉染。具體流程如下:1. 對慢病毒基因進行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆轉錄和整合的能力,但保留產生病毒顆粒必須的蛋白的能力。2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質粒同時進行對包裝細胞的轉染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復制缺陷型慢病毒載體顆粒。
更新時間:2020-05-14
慢病毒構建并包裝后,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉染。具體流程如下:
1. 對慢病毒基因進行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆轉錄和整合的能力,但保留產生病毒顆粒必須的蛋白的能力。
2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質粒同時進行對包裝細胞的轉染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復制缺陷型慢病毒載體顆粒。
3. 使用上述獲得的慢病毒顆粒轉染目的細胞。
4. 根據慢病毒攜帶的標記基因,轉染得到的細胞進行熒光蛋白檢測或加入抗生素進行細胞篩選。
5. 熒光性強或者克隆數多的細胞系加以傳代培養并保存。
Ebiofield——e生物界,為艾柏森(江蘇)生物科技有限公司所屬的聚焦于生物醫藥外包服務一體化的品牌。Ebiofield——e生物界,作為堅持生物技術自主開發的服務提供商,公司在成立5年內便迅速發展壯大,并已持續輸出轉讓了多項生物技術,獲得與多家的生命科學試劑、服務或儀器生產商的成功合作經驗。