免疫熒光實驗

免疫熒光技術又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種，抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體上標記熒光基因，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或者組織內的相應抗原（或抗體）利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織從而確定抗原或抗體的性質和定位基本流程

1.細胞準備。對單層生長細胞，在傳代培養時,將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中，待
細胞接近長成單層后取出蓋玻片，PBS洗兩次;對懸浮生長細胞，取對數生長細胞，PBS離心洗滌
(1000rpm,5min) 2次，用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片
2.定。根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4°C保存3個
月。PBS洗滌3x5 min
3.通透。使用交聯劑(如多聚甲醛)固定后的細胞，一般需要 在加入抗體孵育前，對細胞進行通透處理,
以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min.通透
后用PBS洗滌3x5 min
4.封閉。使用封閉液對細胞進行封閉，時間一般為30min
5.一抗結合。室溫孵育1h或者4°C過夜。 PBST漂洗3次， 每次沖洗5min
6.二抗結合。間接兔疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次沖洗5min后，用蒸餾
水漂洗-次
7.封片及檢測。滴加封片劑- -滴， 封片，熒光顯微鏡檢查