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Cre重組酶和L oxP序列。Cre重組酶是一種位點特異性重組酶,能介導兩個LoxP位點(序列)之間的
特異性重組,使L oxP位點間的基因列被刪除或重組。LoxP序列是由兩個13bp反向重腹序列和中間間隔
的8bp列共同組成,8bp的間隔序列同時也確定了LoxP的方向。Cre在催化DNA鏈交換過程中與DNA共
價結合,13bp的反向重復例是Cre酶的結合域。
Cre重組酶介導兩個LoxP位點間的重組是一個動態、 可逆的過程,可以分成三種情況:
1.如果兩個LoxP位點位于一條DNA鏈上,肪向相桐,Cre重組酶能有效切除兩個LoxP位點間的例;
2.如果兩個LoxP位點位于一條DNA鏈 上,但方向相反,Cre重 組酶能導致兩個LoxP位點間的序列倒位;
3.如果兩個LoxP位點分別位于兩條不同的DNA鏈或染色體上,Cre酶能介導兩條DNA鏈的交換或染色體易.
位。
另外,Cre不僅可以識別LoxP的2個13bp的反向重復序列和8bp的間隔區域,而且當一個13bp的反向
重復序列或者8bp的間隔區發生改變時仍能識別并發生重組。利用這一特點, 人們在構建載體時可以根據
要改造L .oxP位點序列,以以于特定的基因突變或修復,增加了該系統的應用范圍。
誘導性基因敲除以Cre/loxp系統為基礎,但卻是利用控制Cre表達的啟動子的活性或所表達的Cre酶活
性具有可誘導的特點,通過對誘導劑給予時間的控制或利用Cre基因定位表達系統中載體的宿主細胞特異
性和將該表達系統轉移到動物體內的過程在時間上的可控性,從而在loxP動物的一 定發育階段和一定組織
細胞中實現對特定基因進行遺傳修飾之目的的基因敲除技術。常見的幾種誘導性類型如下:四環素得
型;干擾素導型;激素誘導型;腺病毒介導型。