MTT實驗

MTT是一種粉末狀化學試劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，中文為 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，是一種黃顏色的染料。

MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在540 或720nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。

主要實驗流程為：

1. 接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul。

2. 培養細胞：同一般培養條件，培養3-5天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。

3. 呈色：培養3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.繼續孵育4 h，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結晶物充分融解。

4. 比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。