單抗制備是一種通過體外合成技術獲得的具有高度特異性的抗體分子。制備單克隆抗體的過程通常包括以下幾個步驟:免疫動物免疫、細胞融合、篩選和鑒定、擴增和純化。
通過將目標抗原物質注射到免疫動物體內,激發免疫系統產生特定抗體。常用的免疫動物包括小鼠、兔子、山羊等??乖镔|可以是純化的蛋白質、多肽片段、細胞表面的膜蛋白等。免疫動物在一定時間內被多次免疫,使其產生刺激和增殖抗體產生細胞(常使用的是小鼠骨髓瘤細胞)。
接下來,將抗體產生的淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合,形成雜交瘤細胞(Hybridoma)。雜交瘤細胞是由兩個細胞融合而成,具有抗體產生的特性和骨髓瘤細胞的無限增殖能力。這種產生的雜交瘤細胞具有雙倍體的染色體,保留了淋巴細胞的抗體產生能力和骨髓瘤細胞的細胞增殖能力。
然后,通過篩選和鑒定,篩選出具有特異性的單克隆抗體。首先,將雜交瘤細胞分裝于多孔板中,使單克隆抗體分泌到培養液中。然后,對培養液中進行鑒定,檢測抗體的特異性和親和力。一般的鑒定方法包括酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、免疫組織化學染色等。通過篩選和鑒定,確定具有特異性和親和力的單克隆抗體。
對鑒定出的單克隆抗體進行擴增和純化,以獲得足夠的數量和高純度的抗體。擴增可以通過培養雜交瘤細胞來實現,雜交瘤細胞在培養基中持續增殖并分泌抗體。純化過程包括抗體的沉淀、洗滌和濃縮等步驟,以從培養液中獲得純凈的單克隆抗體。
單抗制備如何存儲:
1.根據存儲液的要求,加入適當的防腐劑以保持抗體的穩定性。
2.定期監測單抗的存活率和純度,確保存儲的抗體質量。
3.避免多次凍融,每次使用后迅速將剩余的單抗分裝成小份并重新凍存。
4.儲存單抗的容器要密封好,防止空氣中的水分進入。
5.注意記錄存儲抗體的詳細信息,包括批號、濃度、儲存時間等。
6.盡量避免長時間暴露在室溫下,以防抗體的降解和凝集。
7.嚴格遵守實驗室的相關操作規程,確保單抗的安全使用。