噬菌體篩選它將外源多肽或蛋白與噬菌體的一種衣殼蛋白融合表達,融合蛋白將展示在病毒顆粒的表面,而編碼這個融合子的DNA則位于該病毒粒子內。噬菌體展示技術使大量隨機多肽與其DNA編碼序列之間建立了直接聯系,使得各種靶分子(抗體、酶、細胞表面受體等)的多肽配體通過一種被稱為淘選(panning)的體外選擇程序得以快速鑒定。簡單的淘選程序,是將噬菌體展示肽庫與包被有目的靶分子的平板(或磁珠)共溫育,先洗去未結合噬菌體,然后洗脫特異性結合的噬菌體。被洗脫的噬菌體進行擴增,然后再進行下一輪的結合/擴增循環,以富集那些可結合序列。經3-4輪淘選后,通過DNA測序對每個可結合克隆進行定性。
噬菌體篩選展示在噬菌體表面的隨機肽庫可應用于許多方面,包括繪制抗原表位圖譜、研究蛋白質-蛋白質相互作用和鑒定非肽配體的肽模擬型。生物活性肽分子的鑒定可以通過對固定在平板上的純化受體進行淘選也可以在完整細胞上進行淘選。蛋白酶底物的鑒定可通過在隨機肽區域的上游加一段親和tag,然后選用特異性的介質來區分切割和未切割的噬菌體。另外,大的蛋白質分子[如:抗體、激素、蛋白酶抑制劑、酶和結合蛋白也可展示在噬菌體上,通過對隨機突變文庫的篩選,分離出各種具有親和力或特異性改變的變異株。
Ph.D.-12噬菌體展示肽庫試劑盒將隨機十二肽融合到M13噬菌體次要衣殼蛋白(pIII)上,因而是一個組合文庫。所展示的十二肽表達在pIII的N末端,即:成熟蛋白的一個氨基酸就是隨機十二肽的一個氨基酸,十二肽后面是一段短小的間隔多肽,由Gly-Gly-Gly-Ser組成,然后是野生型pIII蛋白。該文庫含有~2.7×10個電轉化序列,用10u1本品提供的噬菌體進行擴增,每個序列一次可產生55個拷貝,對原始文庫進行大量測序(見附錄)表明該文庫序列具有廣泛的多樣性,無明顯的殘基位置偏嗜。建議不要擴增原始文庫來進行另外的淘選試驗,因為一旦再擴增便會出現序列偏嗜現象。