熱門關鍵詞:抗體類,蛋白類,分子細胞類,化學品與試劑
關于細菌表達——
由于其性質,細菌表達系統是一種理想的蛋白質表達系統。它通常是生產重組蛋白和抗體的。到目前為止,許多細菌已經被很好地研究。
在大量細菌中,大腸桿菌和枯草芽孢桿菌細胞系是**的重組蛋白表達宿主。它們在適宜條件下以極低的成本快速復制,而表達水平高,這種特性使其成為大規模生產的有效和經濟的方式。他們的基因組已*測序,遺傳背景和代謝途徑****。另外,由于結構簡單,細菌比真核生物更容易轉染。這些期望的特征使表達過程更容易和更快速。
但在某些方面,優勢也是不利的??梢栽诩毦腥菀椎乇磉_具有少量修飾的蛋白質。雖然細菌中沒有細胞核,高爾基體和內質網。這些結構在細胞運輸和翻譯后修飾(PTM)過程中是必需的。這導致不能產生具有細菌表達系統的膜結合蛋白,包括胰島素受體,血型糖蛋白,幾種酶等。由于在正確折疊中需要這種修飾,因此細菌中產生的蛋白質通常是無活性的并且不起作用。就這些方面而言,真核表達系統更適合表達這些需要折疊,修飾和特殊結構的蛋白質,即使它比細菌表達系統更昂貴并且花費更多時間。
每個表達系統都有其優點和缺點,希望您在實驗中,慎重選擇自己的蛋白表達系統,取得滿意的結果。(蛋白表達系統有何區別,如何挑選?點此直達。)
大腸桿菌表達系統
圖1 大腸桿菌表達系統簡要流程圖
——巨大優勢,供您選擇:
代謝途徑和基因表達的更清晰
通過全基因組測序;
成熟的基因克隆和表達系統;
繁殖快,培養方法簡單,操作簡便,遺傳穩定。
生命周期短
大腸桿菌,可以在充足的營養條件下每20-30分鐘繁殖一次;
具有成本效益的大規模發酵和巨大的生存潛力。
高水平的靶基因表達
表達水平高于正常的真核表達系統。它可以表達高達5%-30%外源基因的蛋白質。
.遺傳背景明確
大腸桿菌的遺傳背景和生理特性非常清楚。有多種細菌菌株具有不同的耐藥性,營養缺陷型突變和抑制突變可供選擇。
抗污染能力強,后續實驗簡單,易控。
有許多現存表達載體可供選擇,它是FDA批準的基因工程宿主菌株。
大腸桿菌表達成功案例
表達蛋白濃度測定
圖4 表達蛋白濃度測定曲線
結果總結:由上述實驗數據以及濃度可知,表達蛋白水平高,穩定,優化條件成功。
枯草芽孢桿菌表達系統
——優勢明確,大量表達蛋白
1. 細胞壁的組成簡單,分泌的蛋白質產品中不會混雜有細胞內毒素
2. 能夠大量分泌胞外/目的蛋白,回收和純化都較為簡單
3. 擁有一套高效的分泌信號肽及分子伴侶系統,可以完成目的蛋白的高效分泌表達,避免包涵體的形成
我司優勢
1. 擁有多種枯草芽孢桿菌表達載體,如pHT101和pHT254.
2. 有多種不同的表達宿主,如胞內表達的AS1、1012和168,分泌表達的WB800N等,可滿足客戶胞內或者分泌表達的不同要求。
3. 可制備高效率的枯草芽孢桿菌感受態。
經典案例
某流感病毒衣殼蛋白,大小100kD,客戶提供基因信息,經優化后構建質粒,表達圖譜如下:
圖5 枯草芽孢桿菌168及1012中蛋白質的表達
我司原核蛋白表達服務流程